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腺病毒ADV

腺病毒ADV

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腺病毒(Adenovirus, ADV)是一種無包膜的線性雙鏈DNA病毒,具有廣泛的細(xì)胞和組織感染能力。感染過程劇烈,適于短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行基因高表達(dá)的實(shí)驗(yàn),與其它病毒相比,腺病毒優(yōu)勢在于插入片段較長,表達(dá)活性強(qiáng)。

  體外應(yīng)用時(shí),腺病毒載體轉(zhuǎn)基因效率高(接近100%的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率),且可轉(zhuǎn)導(dǎo)不同類型的細(xì)胞,對于大量難轉(zhuǎn)染細(xì)胞的基因遞送是一個(gè)很好的工具。但是,在體內(nèi)應(yīng)用時(shí),由于腺病毒免疫原性強(qiáng),感染劇烈,故常會(huì)引起動(dòng)物局部組織炎癥反應(yīng)和機(jī)體免疫反應(yīng),對動(dòng)物體征和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的客觀性造成影響。

ADV包裝和侵染過程

腺病毒包裝與純化

  
腺病毒包裝骨架達(dá)質(zhì)粒與穿梭質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK-293細(xì)胞,待細(xì)胞出現(xiàn)CPE狀態(tài)后通過收集細(xì)胞上清和細(xì)胞裂解物,通過濃縮或氯化銫密度梯度離心純化病毒。 
  CPE(Cytopathic Effect):病毒對組織培養(yǎng)細(xì)胞侵染后產(chǎn)生的細(xì)胞變性,利用此種病變效應(yīng)可進(jìn)行病毒定量。
 

腺病毒滴度檢測

 
    檢測方法:酶聯(lián)免疫法腺病毒滴度測定,根據(jù)計(jì)算感染后染成褐色的陽性細(xì)胞數(shù),來計(jì)算病毒滴度。
       實(shí)驗(yàn)原理:腺病毒感染的陽性細(xì)胞表達(dá)的衣殼蛋白被染成褐色。
       檢測方法:免疫顯色方法
       實(shí)驗(yàn)原理:通過抗5型腺病毒外殼蛋白的單抗與待感染腺病毒樣品的細(xì)胞結(jié)合,再用HRP標(biāo)記的二抗與一抗結(jié)合,經(jīng)顯色液顯色,被感染的細(xì)胞變成褐色,根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù),來計(jì)算病毒滴度。

腺病毒載體優(yōu)勢

     
      ① 表達(dá)快,腺病毒感染細(xì)胞后,1-2天即可表達(dá)
       ② 載體容量大,感染效率高,常用于感染難感染的細(xì)胞
       ③ 不整合到染色體中,無插入致突變性
       ④  具有嗜肝性,易于感染肝細(xì)胞,腺病毒的體內(nèi)應(yīng)用是用于感染肝臟
    不過由于腺病毒免疫原性高,對某些對外源刺激敏感的動(dòng)物模型和組織中易造成炎癥,體內(nèi)應(yīng)用需謹(jǐn)慎。

不同病毒的生物學(xué)特性比較

載體選擇
  和元生物擁有豐富的腺病毒產(chǎn)品,用于操作編碼基因和非編碼基因,如lncRNA、microRNA、circRNA。
       以下腺病毒載體可供您選擇:
調(diào)控方式載體編號載體名稱(載體元件順序)真核抗性熒光啟動(dòng)子默認(rèn)標(biāo)簽載體容量
過表達(dá)H225pADV-mCMV-MCS-3xFLAGN/AN/AmCMV3FLAG>6kb
H201pADV-mCMV-EGFP-3xFLAGN/AEGFPmCMV3FLAG>5kb
H213pADV-mCMV-3xFLAG-EGFPN/AEGFPmCMV3FLAG>5kb
H221pADV-mCMV-3xFLAG-P2A-EGFPN/AEGFPmCMV3FLAG>5kb
H204pADV-mCMV-mCherry-HAN/AmCherrymCMVHA>5kb
H222pADV-mCMV-3xFLAG-T2A-mCherryN/AmCherrymCMV3FLAG>5kb
H12588pADV-EF1-mNeonGreen-CMV-MCS-3xFLAGN/AmNeonGreenCMV3FLAG>4kb
H12589pADV-EF1-mScarlet-CMV-MCS-3xFLAGN/AmScarletCMV3FLAG>4kb
circRNA過表達(dá)H6946pADV-CMV-S-circRNAN/AN/ACMVN/A>5kb
miRNA過表達(dá)H216pADV-U6-miR30(miRNA)-CMV-EGFPN/AEGFPU6N/AN/A
表達(dá)creK0024 pADV-CMV-CreN/AN/ACMVN/AN/A
干擾DKD001pADV-U6-shRNA-CMV-EGFPN/AEGFPU6N/AN/A
DKD004pADV-U6-shRNA-CMV-mCherryN/AmCherryU6N/AN/A
CRISPR敲除H5064pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-3xFLAG-spCas9N/AN/AU63FLAGN/A
H9350pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-sfGFP-P2A-3xFLAG-spCas9N/AsfGFPU63FLAGN/A
H5066pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-EGFPN/AEGFPU6N/AN/A
H218pADV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-spCas9N/AmCherryCMV3FLAGN/A
H5449pADV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-eSpCas9_1.1N/AmCherryCMV3FLAGN/A
  
 

應(yīng)用實(shí)例

  1.Hepatology. (IF=14.079). Zhou YF,et.al. (2018). Cystathionine β-synthase is required for body iron homeostasis. [腺病毒, 肝臟]
  
  感染部位:肝臟
  
  載體名稱:Ad-CBS
  
  注射方式:尾靜脈
  
  注射量:1 x1011 PFU/mL,10ul
  
  檢測時(shí)間:7天
  
  2. Diabetes. (IF=8.095). Xiao Y Z,et.al. (2015). Activation of ERK1/2 ameliorates liver steatosis in leptin receptor deficient (db/db)mice via stimulating ATG7-dependent autophagy. [腺病毒, 肝臟]
  
  感染部位:肝臟
  
  載體名稱:Ad-ATG7
  
  注射方式:尾靜脈
  
  注射量:1 x10PFU /只
  
  檢測時(shí)間:10天
  
  3. Molecular Neurobiology. (IF=5.397). Guo J,et.al. (2015). Overexpression of Fibulin-5 Attenuates Ischemia/Reperfusion Injury After Middle Cerebral Artery Occlusion in Rats. [腺病毒, 大鼠]
  
  注射部位:大鼠大腦皮層
  
  載體名稱:Ad-FBLN
  
  注射方式:腦立體定位注射
  
  注射量:三種不同劑量
  
  檢測時(shí)間:7天
  
  和元生物腺病毒的生產(chǎn)和質(zhì)控采取了國際學(xué)術(shù)界公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)流程,采用AdEasy及Admax腺病毒包裝系統(tǒng)在HEK-293細(xì)胞中進(jìn)行包裝。所獲得的病毒顆粒經(jīng)過超速密度梯度離心和過濾,并通過殼蛋白免疫法進(jìn)行滴度測定。一般情況下腺病毒的滴度在1010~1011pfu/ml,完全可以滿足各類實(shí)驗(yàn)的使用要求。




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